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2021-07-27
Westernblot實(shí)驗(yàn)過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題匯總及處理方案。21、想分離的蛋白是分子量200kd的，SDS-PAGE電泳的分離膠濃度多大合適？濃縮膠的濃度又該用多少？這么大分子量的蛋白容易作WesternBlot嗎？答：分離膠用7％，濃縮膠3.5％，200kd的蛋白不好做。22、如果上樣量超載，要用什么方法來(lái)增加上樣量？答：可以濃縮樣品，也可以根據(jù)你的目標(biāo)分子量透析掉一部分小分子蛋白。一般地，超載30％是不會(huì)有問(wèn)題的。如果已經(jīng)超了不少了，而且小分子量的也要，可以考慮加大膠的厚度，...2021-07-27
Westernblot實(shí)驗(yàn)過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題匯總及處理方案。1、westernblot的優(yōu)點(diǎn)及缺點(diǎn)答：優(yōu)點(diǎn)：靈敏，特異性高，常規(guī)可達(dá)ng級(jí)，Ecl顯色法理論上可達(dá)pg級(jí)。缺點(diǎn)：通量有限。2、為什么我的細(xì)胞提取液中沒(méi)有目標(biāo)蛋白？答：原因有很多：首先排除WB過(guò)程是不是抗體的問(wèn)題，重新實(shí)驗(yàn)、更換抗體；其次排除蛋白是否降解，提取的時(shí)候需要加入蛋白酶抑制劑，a)你的細(xì)胞中不表達(dá)這種蛋白質(zhì)，換一種細(xì)胞；最后考慮此種細(xì)胞是否表達(dá)該蛋白，表達(dá)量高低。3、提取液有的有沉淀，有的很清亮，為什么呢？答...2021-07-27
染色質(zhì)免疫沉淀（chromatinimmunoprecipitationassay,ChIP）是目前研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的方法。它的基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)－DNA復(fù)合物，并將其隨機(jī)切斷為一定長(zhǎng)度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過(guò)免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段，通過(guò)對(duì)目的片斷的純化與檢測(cè)，從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。ChIP不僅可以檢測(cè)體內(nèi)反式因子與DNA的動(dòng)態(tài)作用，還可以用來(lái)研究組蛋白的各種共價(jià)修飾與基因表達(dá)的關(guān)系。而...2021-07-27
分子生物學(xué)主要研究具體生物大分子在某一生物學(xué)行為過(guò)程中的表達(dá)變化、功能和作用方式；主要涉及基因的表達(dá)調(diào)控、蛋白相互作用、信號(hào)分子間的交互對(duì)話等。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常需要我們?cè)诰唧w實(shí)驗(yàn)前對(duì)所關(guān)注的基因的一些基本信息、可能受哪些因素調(diào)控、與哪些分子可能存在潛在的相互作用，可能參與哪些生物學(xué)行為等進(jìn)行一些初步的判斷，然后根據(jù)這些信息，提出合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，并通過(guò)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證。那么，如何獲得上面的這些信息，除了根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果提供的線索和深入研究相關(guān)文獻(xiàn)以外，還會(huì)用到一些分子生物學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)...2021-07-26
RT-PCR，逆轉(zhuǎn)錄PCR或稱反轉(zhuǎn)錄PCR（ReverseTranscriptionPCR），是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的一種廣泛應(yīng)用的變形。在RT-PCR中，RNA在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下被逆轉(zhuǎn)錄成為互補(bǔ)DNA（complementaryDNA，cDNA），再以此為模板通過(guò)PCR進(jìn)行DNA擴(kuò)增?；驹恚河媚孓D(zhuǎn)錄酶以RNA為模板合成與其互補(bǔ)的DNA（cDNA）的過(guò)程。因?yàn)閙RNA末端存在PolyA，所以用OligodT作為通用引物與其互補(bǔ)。商品化的反轉(zhuǎn)錄試劑盒里通常除了OligodT之外，...2021-07-23
對(duì)于冰箱，我們并不陌生，現(xiàn)在幾乎家家戶戶都有冰箱，這是一種常用家電，而防爆冰箱主要應(yīng)用在石油、化工、軍事、醫(yī)藥、科研、實(shí)驗(yàn)室等領(lǐng)域，屬于特種冰箱。實(shí)驗(yàn)室防爆冰箱用于儲(chǔ)存易燃、易爆、易蒸發(fā)、易腐蝕等化學(xué)試劑、實(shí)驗(yàn)試劑等，適用于高校各實(shí)驗(yàn)室、科研單位的實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所等，就是為了防止爆炸引起的人員或者財(cái)產(chǎn)上的損失。美菱生物醫(yī)療2~8℃防爆冰箱產(chǎn)品特點(diǎn)：全面防靜電：箱殼與內(nèi)襯、門(mén)殼及門(mén)內(nèi)襯均采用銅絞線連接，存儲(chǔ)空間內(nèi)各活動(dòng)部件均為金屬制作。多種防爆方式：整機(jī)防爆，采用隔爆型、本質(zhì)安全型及澆...2021-07-23
通常我們會(huì)將實(shí)驗(yàn)室的純水分為四個(gè)不同的等級(jí)，按照級(jí)別分為：純水、去離子水、實(shí)驗(yàn)室Ⅱ級(jí)純水以及超純水。這四類不同的純水通常根據(jù)電導(dǎo)率來(lái)進(jìn)行區(qū)分和檢測(cè)。1、純水純水也叫純化水，它的電導(dǎo)率會(huì)在1-50μs/cm之間，它可經(jīng)由單一弱堿性陰離子交換樹(shù)脂、反滲透或單次蒸餾制成。一般應(yīng)有在玻璃器皿清洗、清洗劑用水、恒溫恒濕實(shí)驗(yàn)室和高壓滅菌器之間。2、去離子水去離子水的電導(dǎo)率通常都在1.0-0.1μs/cm之間，通過(guò)采用含強(qiáng)陰離子交換樹(shù)脂的混床離子交換制成。它們能夠滿足各種制備試劑、稀釋樣品...- 純水系列
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